OPTIMAL PROTEIN Cj0391c EXPRESSION AND PURIFICATION METHODS FOR PROTEIN IDENTIFICATION

Abstrak

Identifikasi mekanisme virulensi yang terkait dengan Campylobacter jejuni adalah bidang yang penting karena merupakan target potensial untuk vaksin masa depan. Contoh protein yang disekresikan oleh C. jejuni yang telah dipelajari baru-baru ini adalah Cj039lc.  Analisa bioinformatika menemukan bahwa protein ini bisa menjadi ?-helical pore forming protein (PFP).  Untuk mengetahui lebih lanjut mekanisme virulensi dari protein ini maka perlu dilakukan identifikasi lebih mendalam tentang protein.  Oleh karena itu penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi metode ekspresi dan purifikasi yang optimal untuk menghasilkan protein Cj3091c yang murni dan cukup, yaitu 1 mg/ml Cj0391c murni.  Pemurnian dilakukan dengan Iminobilized metal Affinity Chromatography (IMAC) kolom yang digunakan untuk memulihkan protein rekombinan. SDS-PAGE dan Western blotting digunakan sebagai metode untuk menentukan kondisi optimum untuk elusi protein rekombinan Cj039lc.  Hasil dari ekspresi dan pemurnian pada percobaan ini menyimpulkan bahwa konsentrasi optimum Imidazole dalam buffer pencuci untuk menghasilkan konsentrasi tinggi protein Cj039lc murni adalah kombinasi dari langkah awal 20 mM buffer pencuci Imidazole diikuti dengan dua kali mencuci menggunakan 40 mM Imidazole. Konsentrasi akhir l mg/mL Cj039l c kemudian siap untuk digunakan untuk Small-angle X-ray scattering (SAXS) dan Dynamic light scattering (DLS).